1. HE染色：材料：石蜡切片染料：苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。应用：一般的组织变化和组织产物都可以通过这一染色法显示出来，是形态学最常用的染色方法。结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。2.甲苯胺蓝染色：材料：石蜡切片，

外泌体内吞示踪外泌体是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。外泌体内吞示踪是用示踪剂 (如有机染料、荧光蛋白、造影剂、核素等) 标记外泌体，用特定的影像学方法对动物体内外泌体进行追踪，从而观察外泌体在体内的生物学行为和检测靶细胞内吞外泌体的情况，并有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的常用标记方法是亲脂性染料，影像学的常用方法是光学成像。1.实验原理用于外泌体标记的亲脂性染料，可

外泌体鉴定在外泌体研究中，外泌体鉴定是继分离之后的关键步骤。其目的是为了判断样本是否含有外泌体，是否可以表达特异性的外泌体标志蛋白，是否落在外泌体常规的粒径范围。为了更好的进行生物学功能学、形态学研究和生物标记研究，需要对分离后的外泌体来进行鉴定。我们鉴定的方法主要有透射电镜（TEM）、纳米颗粒跟踪分析（NTA）和蛋白标志物检测（western blotting）。1.实验原理外泌体透射电镜鉴定外泌体大小、形态，可观测样本中是否存在外泌体样结构（通常为茶托型或一侧凹陷的半球形）；通过粒子直径分析系统测算和统计样品中粒子

外泌体分离外泌体（Exosomes）是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150 nm），其特指直径在40-100 nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，这些外泌体通过转运关键蛋白和遗传物质，在细胞通讯和表达遗传中发挥着关键作用。且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。通常采用离心法来进行外泌体分离。1.实验原理利用分子的大小比重物理原理和多聚物的沉淀原理，使用离心法分离外泌体是至今为止最常用的方法。 此方法可大量提取、成本低、操作简单、耗时短。分离的外泌体可作为治疗靶标、药物或

活体成像活体成像技术(in vivo imaging technique) 是指在不对实验动物造成伤害的前提下，应用影像学方法，利用一套非常灵敏的光学检测仪器对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究的技术。实验者可借此技术非侵入式、直观地观测活体动物体内肿瘤的生长，转移、疾病的发展过程、基因的表达变化等生物学过程，实现对同一实验对象不同时间点各种生物学行为进行跟踪观察。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高、实验成本低等特点，目前已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等领域。1.实验原理1.1光学原理光在哺乳

人源性肿瘤移植模型-PDX人源性肿瘤移植模型（patient-derived tumor xenograft，PDX）是将来源于患者的新鲜肿瘤组织移植至免疫缺陷小鼠体内所构建的移植瘤模型。该模型模拟了肿瘤在病人体内的生长情况，能准确地反映人体肿瘤的生物学特征，为肿瘤的生物学研究、诊断标志物的寻找和药物筛选等提供了一个更优越的体内模型，对肿瘤临床前期评估、治疗和预后具有重要的转化意义，特别是对于肿瘤的个体化诊断和治疗具有不可代替的价值。1.实验原理将来源于患者的新鲜肿瘤组织移植至免疫缺陷小鼠体内，依靠小鼠提供的微环境生长成第一代移植瘤。

转移瘤模型肿瘤转移是指癌细胞从原发灶脱落侵入周围组织，最终克服远隔组织微环境，实现转移的现象。 转移瘤（metastatic tumor）实验是利用肿瘤转移动物模型对体内肿瘤转移过程进行研究的方法，其可以更好地揭示肿瘤转移的过程、基因的生物学功能及信号通路的作用。1.实验原理 肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入动物的血液系统内，能够较好地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。常用的接种方法是尾静脉注射和左心室注射法。

原位瘤模型原位瘤实验(orthotopic tumor)，即原位移植(orthotopic transplantion) 模型实验，是将肿瘤组织/细胞接种到肿瘤原发组织器官内，使之产生肿瘤并形成自发性转移灶，能够更好地模拟肿瘤的生长、发展、侵袭及转移的全过程。与皮下荷瘤模型相比，原位移植模型可模拟出同原发肿瘤发病部位相似的肿瘤微环境，能够更好地预测药物效果，具有一定的临床学意义。1.实验原理肿瘤细胞与基质细胞、组织特异性免疫细胞的相互作用会影响肿瘤的生长、分化和药物敏感性。采用开放手术打开暴露原发肿瘤对应的动物组织器官，将肿瘤组织或细胞种植到

皮下荷瘤模型皮下荷瘤（subcutaneous tumor）实验是将肿瘤移植到同种或异种动物的皮下形成肿瘤块，利用对动物体内肿瘤的生长情况的观测，评估肿瘤细胞/组织在动物体内的增殖能力，一般用于抑制肿瘤生长（细胞增殖）的药物的筛选检测，目前已成为检测致瘤潜力，评估体内新型抗癌药物的通用方法。1.实验原理皮下荷瘤实验是将肿瘤细胞接种到动物侧腹部或背部皮下，利用肿瘤细胞吸收体内营养进行细胞增殖后，形成肉眼可见且可测量的肿瘤组织，通过观察和监测肿瘤组织的形成情况，评估肿瘤细胞在动物体内的增殖能力及抗肿瘤药物疗法的可行性。2

患者来源肿瘤类器官肿瘤类器官定义肿瘤组织细胞、肿瘤干细胞或肿瘤特异性细胞在特殊的培养微环境下形成具有与实体肿瘤类似的组织结构和功能的三维细胞集合体，包含自我更新和分化能力的干细胞，拥有原发肿瘤的基因谱系和病理特征，是肿瘤研究的新型体外模型。类器官技术实现了更加紧密的细胞与细胞间以及细胞与基质间的作用，可用于遗传发育、组织器官移植、疾病研究等多个生命学领域研究，是一种优秀的体外模型。肿瘤类器官的优点及发展历程(1)与体内实体瘤组织结构及功能类似；(2)高度保留肿瘤异质性；(3)利于高通量筛选；(4)便于基因操

细胞系构建细胞系（cell line）指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体，也指可长期连续传代的培养细胞。耐药细胞系是通过模拟癌症患者在化疗期间所经历的条件而开发的，与亲代细胞系相比，耐药细胞系表现出2-8倍的抗性。稳转细胞系指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系，包括敲降（KD）细胞系、敲除（KO）细胞系、敲入（KI）细胞系。一、耐药细胞系构建1.实验原理细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现P-糖蛋白等耐药相关蛋白，使细胞逐渐对药物耐受。具有抗性

细胞染色细胞染色是一种通过化学或其他方法使细胞着色的技术，可直观的了解细胞生长状况、形态等细胞特性以及其中的分子表达水平与定位等，它包括细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光染色、EdU/BrdU染色、TUNEL染色等。一、细胞免疫化学染色1．实验原理免疫细胞化学染色（Immunocytochemistry，ICC）原理是通过引入附有标记物的外源性抗体（或抗原），使之锚定与细胞标本中相应的抗原（或抗体）部位，标记物经呈色反应从而显示待检抗原（或抗体），根据标记物的不同分为：免疫酶细胞化学染色、免疫荧光细胞化学染色等。2．实验原理图3．实验步

细胞周期与凋亡检测细胞周期是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程，通常将子细胞形成作为一次细胞分裂结束的标志。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂， 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。细胞凋亡（Apoptosis），或者说程序性细胞死亡（Programmed cell death），是细胞内建的防御机制之一，在生物的正常发育及疾病抵御中起到重要的作用，涉及一系列基因的激活、表达以及调控，是细胞为更好地适应环境而主动争取的一种死亡过程。具体表现为：出芽形成凋亡小体、核小体间DNA的切割

细胞增殖细胞增殖（cell proliferation）是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础，是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。细胞增殖是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标，常用的检测方法有BrdU染色、EdU染色和克隆形成等。一、Brdu/EdU染色1.实验原理BrdU（5-Bromo- 2’-deoxuuridine）是胸腺嘧啶的衍生物，可替代胸腺嘧啶选择性整合到新合成的DNA中（细胞周期S期）。这种掺入可以稳定存在，并随着DNA复制进入子细胞中。利用BrdU特异性抗体可以检测掺入的BrdU，进而判断细胞的增殖能力。EdU（5-Ethynyl-2'-deo

细胞迁移与细胞侵袭实验细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的定向移动，它是机体细胞的一种正常功能行为。而细胞侵袭（cell invasion）是指细胞通过细胞外基质从一个区域迁移到另一个区域的能力，常用来评估肿瘤细胞在正常组织中转移的能力，但正常细胞，如巨噬细胞也有相同的能力。分析细胞迁移或侵袭能力的常见方法有Transwell迁移、Transwell侵袭和细胞划痕。一、细胞划痕实验1．实验原理细胞划痕是较为简捷测定细胞迁移运动的方法，类似机体伤口

细胞活力检测细胞活力是一个群体中健康活细胞比例的指标，反映的是细胞健康的总体情况。细胞活力的测定旨在评估细胞的物理和代谢状态，以确定治疗或培养条件对细胞稳态的影响；通常采用CCK-8、MTT等方法进行检测。1．实验原理CCK-8是一种基于WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]而广泛应用于测定细胞增殖或细胞毒性的一种高灵敏度、无放射性的比色检测方法。其原理是WST-8在电子载体作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye），生成的甲瓒产物的数量与活

荧光素酶报告实验（Luciferase reporter assay）荧光素酶报告基因（Luciferase reporter）检测是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素，在荧光素氧化的过程中，会发出生物荧光，可通过酶标仪等设备测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光，常应用于miRNA靶基因验证及启动子转录活性调控等方向研究。1. 实验原理利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把目的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上/下游，构建成荧光素酶报告

免疫印迹（western blotting）免疫印迹（western blotting）是利用抗原抗体特异反应特性，定性检测样本中目的蛋白表达量；是检测基因蛋白表达量最常用的方法，广泛应用于基础科研领域。1. 实验原理在电场作用下，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将总蛋白根据分子量大小进行分离，然后将其转印至固相载体（硝酸纤维膜或PVDF膜）。载体膜与特异识别特定抗原的抗体孵育后，再与辣根过氧化物酶标记的二抗特异结合。最后加入辣根过氧化物酶底物显色（暗室曝光或化学发光成像），结合显色条带光密度分析目标蛋白表达量。2. 实验步骤2.1 总蛋白提取2.1.1

RNA pull-down实验RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。通过该实验可以富集并鉴定或验证与目标RNA有相互作用的蛋白质。1. 实验原理RNA沉降（Pull down）主要是检测蛋白质与RNA之间的相互作用。RNA pull down 是使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成 RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。收集从磁珠上洗脱下来的蛋白质，可通过质谱和Western Blot来确定和验证与RNA互作的蛋白。2.实验流程图3.实验步骤3.1 生物素探针

RIP实验RIP实验（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 结合蛋白免疫沉淀）是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBPs（RNA结合蛋白）的互作关系等。1.实验原理RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，主要是运用针对目标蛋白的抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，通过免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来，将复合物中的RNA纯化出来后就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序