荧光素酶报告实验（Luciferase reporter assay）荧光素酶报告基因（Luciferase reporter）检测是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素，在荧光素氧化的过程中，会发出生物荧光，可通过酶标仪等设备测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光，常应用于miRNA靶基因验证及启动子转录活性调控等方向研究。1. 实验原理利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把目的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上/下游，构建成荧光素酶报告

免疫印迹（western blotting）免疫印迹（western blotting）是利用抗原抗体特异反应特性，定性检测样本中目的蛋白表达量；是检测基因蛋白表达量最常用的方法，广泛应用于基础科研领域。1. 实验原理在电场作用下，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将总蛋白根据分子量大小进行分离，然后将其转印至固相载体（硝酸纤维膜或PVDF膜）。载体膜与特异识别特定抗原的抗体孵育后，再与辣根过氧化物酶标记的二抗特异结合。最后加入辣根过氧化物酶底物显色（暗室曝光或化学发光成像），结合显色条带光密度分析目标蛋白表达量。2. 实验步骤2.1 总蛋白提取2.1.1

RNA pull-down实验RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。通过该实验可以富集并鉴定或验证与目标RNA有相互作用的蛋白质。1. 实验原理RNA沉降（Pull down）主要是检测蛋白质与RNA之间的相互作用。RNA pull down 是使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成 RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。收集从磁珠上洗脱下来的蛋白质，可通过质谱和Western Blot来确定和验证与RNA互作的蛋白。2.实验流程图3.实验步骤3.1 生物素探针

RIP实验RIP实验（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 结合蛋白免疫沉淀）是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBPs（RNA结合蛋白）的互作关系等。1.实验原理RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，主要是运用针对目标蛋白的抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，通过免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来，将复合物中的RNA纯化出来后就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序

qPCRqPCR（Quantitative Real-time PCR）即实时荧光定量PCR技术，利用插入性染料或荧光探针，监控PCR过程中的荧光强度以比较样品间的DNA水平，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。根据化学发光原理可以分为：荧光染料法，TaqMan探针法。1. 实验原理1.1 荧光染料法在PCR反应体系中，加入过量荧光染料，荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。1.2 TaqMan探针法在PCR扩增时加入一对引物的同时另外加入一条特异性的TaqMan荧

ELISAELISA，即酶联免疫吸附实验，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。 ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术，其作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。1. 实验原理ELISA主要基于抗原或抗体的两个特点：1）固定在载体表面的抗原或者抗体不会失活，仍然保留其免疫反应性；2）酶标记的

Co-IP实验Co-IP（co-immunoprecipitation，免疫共沉淀）被认为是识别或确认体内蛋白质相互作用事件发生的经典方法之一。该方法可以利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白或复合体，能够特异性富集所研究的目标蛋白，由于过程中采用了非变性条件，保留了互作蛋白或复合体的胞内自然状态。1. Co-IP实验原理当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y、Z等蛋白也能富集下来。目前多将protein A/G预先结合固化在磁珠上，使之与

ChlP实验ChIP（Chromatin Immunoprecipitation，简称染色质免疫沉淀）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定，染色质断裂，染色质免疫沉淀，交联反应的逆转，DNA的纯化，以及DNA的鉴定。1. 实验原理在活细胞状态下通过固定细胞将细胞内的蛋白质－DNA复合物交联在一起，并通过酶处理的方式将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过特异性抗原抗体反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段