转移瘤模型

转移瘤模型

肿瘤转移是指癌细胞从原发灶脱落侵入周围组织，最终克服远隔组织微环境，实现转移的现象。 转移瘤（metastatic tumor）实验是利用肿瘤转移动物模型对体内肿瘤转移过程进行研究的方法，其可以更好地揭示肿瘤转移的过程、基因的生物学功能及信号通路的作用。

1. 实验原理

     肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入动物的血液系统内，能够较好地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。常用的接种方法是尾静脉注射和左心室注射法。

2. 实验步骤

2.1制备细胞悬液

预先将细胞接种到培养皿并于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长达到80 %-90 %，经胰酶消化制备细胞悬液。对细胞悬液进行细胞计数，并调整细胞密度。

2.3小鼠的选择和分组

一般选择4-6W同一性别健康小鼠，大多选择免疫缺陷型小鼠。根据实验目的进行实验分组。

2.4肿瘤转移模型的构建

2.4.1尾静脉注射法

    在超净台上，将小鼠固定在固鼠器内，压住鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并扩展血管，用1 mL注射器吸取细胞悬液，于尾部中处三分之一处进针，注意控制速度防止小鼠发生栓塞。每只0.1 mL，即1×106个。不同细胞接种量可能不同，需要预实验进行摸索。

2.4.2左心室注射法

小鼠经麻醉、仰卧式固定、酒精棉球消毒后，轻按胸部，在胸骨左侧第二，三肋间进针（靠近胸骨），注射器内留有气泡时，针头进入左心室；进针3-5 mm，以观察到鲜红血液喷射涌出进入针管，回血液面随着裸鼠心率搏动上下起伏，作为进入左心室的标准；注射，在10 s 内完成；注射完毕后缓慢拔针，棉签按压进针点；裸鼠放置保温台待苏醒；接种后的裸鼠置于SPF环境内饲养，并密切观察。

2.5肿瘤生长转移情况和小鼠存活情况的观察

肿瘤移植后注意观察各组小鼠全身状况和活动情况，当小鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，将小鼠颈椎脱臼处死。定期处死解剖小鼠，观察肺、肝、淋巴结等脏器有无转移灶，统计各部位转移灶数目及大小。也可通过活体成像方法定期观察肿瘤的转移情况。

3. 实验结果示例

将荧光素酶标记的MDA-MB-231细胞经尾静脉注射到小鼠体内，分别于1 h 和24天采用活体成像系统观察肿瘤肺转移情况。28天解剖可见MDA-MB-231细胞在肺部形成转移灶。

4. 参考文献

[1] Gomes, C. A., Junior, C. S., do Valle, J. A., de Assis Lopes, C. T., Barra, A., Gomes, C. C., ... & Gomes, F. C. (2012). Cancer metastasis. Cell Dev Biol, 1(106), 2.

[2] Thies, K. A. , Knoblaugh, S. E. , & Sizemore, S. T. . (2020). Pathological analysis of lung metastasis following lateral tail-vein injection of tumor cells. Journal of Visualized Experiments(159).

[3] E., Heller, M., A., Hurchla, & J., et al. (2011). Hedgehog signaling inhibition blocks growth of resistant tumors through effects on tumor microenvironment. Cancer Research, 72(4).