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  • qPCR

    qPCRqPCR(Quantitative Real-time PCR)即实时荧光定量PCR技术,利用插入性染料或荧光探针,监控PCR过程中的荧光强度以比较样品间的DNA水平,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。根据化学发光原理可以分为:荧光染料法,TaqMan探针法。1. 实验原理1.1 荧光染料法在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。1.2 TaqMan探针法在PCR扩增时加入一对引物的同时另外加入一条特异性的TaqMan荧

  • ELISA

    ELISAELISA,即酶联免疫吸附实验,指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。 ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术,其作为免疫标记技术(包含免疫荧光技术,免疫放射技术,免疫酶技术和免疫胶体金技术)中的一种,已广泛应用于科研和临床实验中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。1. 实验原理ELISA主要基于抗原或抗体的两个特点:1)固定在载体表面的抗原或者抗体不会失活,仍然保留其免疫反应性;2)酶标记的

  • Co-IP实验

    Co-IP实验Co-IP(co-immunoprecipitation,免疫共沉淀)被认为是识别或确认体内蛋白质相互作用事件发生的经典方法之一。该方法可以利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白或复合体,能够特异性富集所研究的目标蛋白,由于过程中采用了非变性条件,保留了互作蛋白或复合体的胞内自然状态。1. Co-IP实验原理当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y、Z等蛋白也能富集下来。目前多将protein A/G预先结合固化在磁珠上,使之与

  • ChlP实验

    ChlP实验ChIP(Chromatin Immunoprecipitation,简称染色质免疫沉淀)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化,以及DNA的鉴定。1. 实验原理在活细胞状态下通过固定细胞将细胞内的蛋白质-DNA复合物交联在一起,并通过酶处理的方式将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过特异性抗原抗体反应沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段

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